Канцерогенез

Дальнейшие исследования свойств гена туе, позволяющих ему кооперировать с онкогеном EJ-ras, показали, что длинные концевые повторы (LTR), несущие как промотеры, так и энхен-серы, сами по себе не могут быть ответственными за наблюдаемую активность клона в результате лишь делеции Sac I фрагмента величиной 1,6 т. о. , располагающегося в белоккодирующих последовательностях онкогена gag-myc в пределах pSVv-myc (см. стр. 311). При котрансфекции с ДНК EY-ras-онкогена этот модифицированный провирус не индуцировал заметного опухолевого фенотипа. Следовательно, активность гена туе зависела от синтеза части или всего gag-myc белка.

Аналогичный результат авторы получили при использовании гена туе из мышиной плазмоцитомы.

Комплементационные группы. Способность генов EJ-ras и туе кооперировать побудила R. Weinberg и его сотрудников испытать и другие комбинации генов (туе с N-ras и др. ).

Активный клон N-ras был в лаборатории R. Weinberg изолирован из клеток линии HL-60. N-ras и Ha-ras из EJ-линии кодируют сходные белки. Как и ожидалось, N-ras вел себя идентично с Haras-геном в его способности кооперировать с геном туе.
Поэтому оба ras-гена были помешены в одну и ту же группу комплементации.

Любопытный результат получен в комплементационных опытах с двумя вирусными генами, кодирующими средний и большой Т-антигены вируса полиомы, изолированными как отдельные молекулярные клоны. Эти гены придают культивированным крысиным клеткам определенные и различающиеся друг от друга фенотипы. Средний Т-антиген индуцирует морфологическое изменение и независимость от закрепления на поверхностях, в то время как большой Т-антиген определяет зависимость от сыворотки и клеточную иммортализацию.

Опыты показали, что трансфекция клона гена среднего Т-анти-гена (рРуМТ 1) одного или вместе с EJ-ras-ДНК не индуцирует фокусов в культурах. Наоборот, котрансфекция клона гена среднего Т-антигена и клопа гена туе вызывала фокусы трансформации. В опытах на туморогенность эти культуры дали опухоли у 2 из 5 животных. Таким образом, средний Т-антиген вел себя сходно, но не идентично с EJ-ras и мог быть включен в ту же комплементарную группу, что и гены семейства ras.

Трансфекция клона усеченного гена большого Т-антигена (одного) не оказывала какого-либо действия на морфологию монослоя 3° КЭФ. Тот же результат дала котрансфекция с тус-клоном (pSVv-mye). Однако при котрансфекции этого клона измененного гена большого Т-антигена с EJ-ras появлялись многочисленные фокусы уже через 10 дней. При инокуляции фокусов контрансфецированных культур голым мышам появлялись быстрорастущие опухоли. В отличие от опухолей, индуцированных комбинацией myc-EJ-ras, которые останавливались в росте по достижении 2 см, эти опухоли продолжали расти до гибели животных.