Канцерогенез

2 LTR                 ^{9ag myc}

АМЛ-Г Th----Ш I b- -iVW

Высокая степень консервативности гена myc указывает, что онкоген МС 29, возникнув из птичьего генома, мог бы, тем не менее, быть способен функционировать и в крысиных клетках. Полный провирусный клон был получен путем присоединения кольцевого измененного провирусного клона к дополнительному провирус-ному сегменту на его правом (3'—провирусном) конце. Это создало тандемно-дуплицированные сегменты LTR на левом (5'-проксимальном) и правом (З'-проксимальном) концах прови-руса. Таким образом, представилась возможность испытать биологические свойства этих v-myc -клонов. Каждая ДНК наносилась на ЗТЗ-клетки, КЭФ (первого или второго цикла) или отдельно, или вместе с ДНК Ecogpt-клона. При этом не наблюдали эффекта на трансфецированные клетки.

В последующих опытах тестировали действие онкогенов ras и EJ-ras, введенных вместе в 2° КЭФ. В условиях, в которых FJ-ras или myc раздельно не оказывали эффекта на многослойные культуры, два гена совместно вызывали драматические изменения фенотипа. Быстро растущие фокусы морфологически измененных клеток становились видимыми в течение 8 дней после трансфекции. Это резко контрастировало со слабым ростом клеток, несущих только EJ-ras-ген.
Котрансфецированные (ras+myc) клетки были туморогенными при введении голым мышам или 12-дневным крысам, давая опухоли, которые росли до размера 1 см в диаметре за 2 нед после инокуляции. Блот-анализ образцов ДНК из опытных линий по Саузерну показал присутствие множественных копий обоих трансфецированных онкогенов, EJ-ras и v-myc.

На основании этих опытов авторы сделали заключение, что эффекты установления культуры клеток in vitro могут быть воспроизведены («мимицированы»), по крайней мере частично, путем введения активного онкогена myc. Как «культивирование», так и приобретение гена myc делали КЭФ очень чувствительными к трансформирующему действию гена EJ-ras. Однако разница между двумя эффектами, как выяснилось, все же существует, и она была выявлена. EJ-ras-myc-трансфектанты индуцировали опухоль, которая достигала статического размера 2 см после 3 нед быстрого роста в голых мышах. В противоположность этому «установленная» культура КЭФ, несущая ген EJ-ras, индуцировала опухоли, которые росли, пока не убивали животное. Опыт был оценен следующим образом: ген myc резко увеличивает проявления фенотипа, создаваемого онкогеном EJ-ras, однако не способен полностью воспроизводить клеточные признаки, приобретаемые в результате установления культуры и иммортализации in vitro.