Клеточные трансформирующие гены

экспрессии его генетической информации и увеличением дозы онкобелка [Chang E. et al. , 1982].

Генетическое повреждение, ведущее к активации протоонко-гена c-Ha-ras 1, т. е. проявлению его трансформирующих свойств в системе NIH ЗТЗ-клеток, как было установлено, связано с единичной точковой мутацией в 35-й позиции 1-го экзона (а именно — заменой гуанозина на тимидин). Эта замена нуклеотидов в прото-онкогене сопровождается, в свою очередь, изменением 12-го ко-дона ГГЦ на ГТЦ с замещением 12-й аминокислоты, глицина, на валин в продукте онкогена — белке p2l [Reddy E. et al. , 1982; Tabin С. et al. , 1982; Taparowsky E. et al. , 1982; Capon D. et al. , 1983; Ncwmark P. , 1983].

Интересно, что вирусные онкогены v-ras (онкоген вируса саркомы мышей штамм Харвея, происходящий из крысиного генома) и v-ras/bas (онкоген вируса саркомы мышей BALB/c) также содержат мутацию в 12-м кодоне для соответствующей аминокислоты белка р21. В этом случае 12-й кодон ГГА (для глицина) в протоонкогене c-Ha-ras крысиных клеток заменен на кодон АГА, кодирующий аргинин [Ellis R. et al. , 1980; Suku-mar S. et al.
, 1983].

Поскольку было установлено, что уровень экспрессии онкогена c-Ha-ras 1 в клетках рака мочевого пузыря незначительно отличается от такового в нормальных клетках человека, было выдвинуто предположение о том, что точковая мутация протоонкогена приводит к существенным структурно-конформационным изменениям онкобелка р21 семейства ras [Tabin С. et al. , 1982].

Генетическое повреждение протоонкогена c-Ha-ras 1 приводит при точковой мутации к замене единственного нуклеотида в 12-м кодоне. Это, в свою очередь, существенно изменяет конфигурацию кодируемого белка р21. Точковую мутацию, расположенную в 12-м кодоне, можно обнаружить при рестрикционном энзи-матическом анализе структуры самого онкогена (меняются сайты рестрикции для эндонуклеаз Нра II, Msp I и Nae I). В соответствии с этими данными физическое картирование онкогенов, определение изменений их сайтов рестрикции при воздействии ряда эндонуклеаз после генетического повреждения стало важным и эффективным принципом выявления точковых мутаций или иных генетических перестроек при активации клеточных протоонкогенов в онкогены (клеточные трансформирующие гены).

Примером использования этого принципа при анализе человеческих онкогенов могут служить исследования ряда лабораторий, выявивших изменения в структуре клеточных протоонкогенов при малигнизации ткани [Князев П. Г. и др. , 1984; Feinberg A. et al. , 1983; Yuasa Y. et al. , 1983]. С помощью набора специфических рестриктаз Нра II, Msp I, Nae I, «узнающих» по изменению сайта рестрикции характер и место генетического повреждения [Reddy E. et al. , 1982J, удалось определить как природу вовлеченного в процесс неоплазии онкогена, так и область генетического

18