Клеточные трансформирующие гены

повреждения. Это было осуществлено на примере трех злокачественных опухолей человека: рака молочной железы, нейробла-стомы, меланомы. Во всех трех опухолях был идентифицирован активированный клеточный ген c-Ha-ras 1 и установлено, что активация протоонкогена не связана с точковой мутацией в 12-м кодоне трансформирующих генов.

Эти примеры, как и многие другие аналогичные им и известные из литературы последних лет, демонстрируют эффективность комбинации современных молекулярно-биологических и генно-инженерных методов в анализе молекулярного механизма неопластической трансформации клеток и тканей.

Наличие ферментов, регистрирующих точковую мутацию в 12-м кодоне трансформирующего гена Ha-ras для белка р21, открыло возможность проводить широкий скрининг подобных мутаций в образцах ДНК опухолей человека. Это попытались сделать, в частности, A. Feinberg и соавт. (1983). Они протестировали рестриктазами Нра II/Msp I и Nae I ДНК 29 опухолей человека, включая 19 первичных опухолевых тканей легких и 10 первичных карцином мочевого пузыря, на наличие точковой мутации, обнаруженной ранее в EJ ДНК. Поскольку ни в одном случае авторы не выявили подобной мутации, было выдвинуто предположение, что 12-й кодон в процессе естественного канцерогенеза у человека повреждается редко [Feinberg A. et al. , 1983]. Эта работа, однако, не отрицает значения точковых мутаций в активации клеточных протоонкогенов вообще. Указанные авторы и другие исследователи отмечают, что в протоонкогене Ha-ras могут существовать другие кодоны, в которых точковые мутации приводят к активации и проявлению трансформирующих свойств онкогена Ha-ras в клетках NIH ЗТЗ.

Вскоре это предложение было подтверждено экспериментально. Примерно 10% случайно отобранных карцином мочеиспускательного тракта человека содержат активный (в NIH ЗТЗ-системе) онкоген Ha-ras. Все образцы ДНК указанных опухолей содержали c-Ha-ras-локус, имеющий точковую мутацию в 61-м кодоне, что определено эндонуклеазой рестрикции BstN I [Fujita J. et al. , 1984]. Авторы полагают, что активация протоонкогена c-Ha-ras имеет место преимущественно в опухолях мочеиспускательного тракта человека.

К. Shimizu и соавт. (1983) предсказывают возможность существования, например, для c-Ki-ras 2-протоонкогена значительного числа «уязвимых» мест, способных «запускать» канцерогенез при участии этого онкогена.

Трансформирующий ген клеток рака легкого (опухолевая линия Hs-242) также оказался близкородственным протоонкогену c-Ha-ras [Yuasa Y. et al. , 1983]. В этом случае генетическим повреждением, ответственным за трансформирующую активность белка р21, является точковая мутация во 2-м экзоне (61-й кодон), что сопровождается изменением А->-Т в 61-м кодоне и соответ-

274