Клеточные трансформирующие гены

ствующей заменой 61-й аминокислоты, глутамина на лейцин, в белке р21. При этом 12-й кодон оставался неизмененным и был идентичен нормальной аллели протоонкогена c-Ha-ras 1 [Yuasa Y. et al. , 1983). О. Fasano и соавт. (1984) изучили роль точковых мутаций в активации клонированного протоонкогена человека c-Ha-ras 1 при бисульфитном мутагенезе. Авторы показали, что большинство мутаций не превращают протоонкоген в онкоген, однако мутации, приводящие к единичной замене аминокислот в положении 12, 13, 59 —61 кодируемого белка, активируют трансформирующий потенциал Ha-ras в отношении клеток N1H ЗТЗ.

Таким образом, единичная замена аминокислоты в 12-м или 61-м положении в молекуле белка р21, по-видимому, может быть достаточной для индукции структурных, конформационных и функциональных изменений, приводящих к проявлению у белка р21 трансформирующих свойств [Lane M. et al. , 1982; Reddy E. et al. , 1982J.

Вскоре в исследованиях D. Stacey и Н. F. Kung (1984) были получены прямые данные, подтверждающие возможность злокачественной трансформации клеток NIH ЗТЗ при помощи микроинъекции в них онкобелка р21. Онкобелок р21 (продукт экспрессии онкогена EJ-c-Ha-ras 1) для этих опытов получен генно-инженерным методом в Escherichia coli.

R. Shafer и соавт. (1984) провели скрининг трансформирующей активности препаратов ДНК ряда неоплазм человека в отношении клеток NIH ЗТЗ. Образцы ДНК изолировали из различных опухолей, включая меланомы, карциномы молочной железы, предстательной железы, желудка, нейробластомы и некоторых форм лейкозов.
Из 24 препаратов ДНК только три (рак молочной железы — линия SK-BR-3, меланома — гетеротрансплантат Ja-1 и нейробластома — линия LA-N-1) с высокой эффективностью трансформировали клетки NIH ЗТЗ (рис. 11 —данные по раку молочной железы). В двух циклах трансфекции трансформирующий ген меланомы и нейробластомы был ассоциирован с Alu-последовательностями. Многократные попытки обнаружить Alu-последовательности в ДНК некоторых клонов первичных и вторичных трансформантов, возникающих от введения ДНК SK-BR-3, оказались безуспешными. Эти данные свидетельствуют о том, что не всегда трансформирующие гены ассоциированы с умеренно повторяющимися последовательностями семейства Alu (Князев П. Г. и др. , 1984; Schafer R. et al. , 1984].

В первичных и вторичных трансформантах клеток NIH ЗТЗ трех указанных образцов опухолевых ДНК был идентифицирован протоонкоген c-Ha-ras 1 [Князев П. Г. и др. , 1984]. Трансформирующий ген c-Ha-ras 1 рака молочной железы, меланомы и нейробластомы в двух циклах трансфекции был представлен маркерным рестрикционным фрагментом Sac I размером 2,9 т. п. о. (рис. 12), дорожки 2 (контроль положительной трансфекции), 5, 8 и 10.

18*