Кооперирование между онкогенами

1980; Rassoulzadegan M. et a!. , I982J. В последующем эти довольно специфические изменения клеток стали связывать с активностью конкретных локусов вирусного генома — онкогенов. Онкогены ДНК-содержащих вирусов, в отличие от ретровирусных онкогенов, являются истинно вирусными (подробнее см. гл. 3). Эти онкогены необходимы для репликации вирусного генома, т. е. они представляют собой конституционные гены и облигатно присутствуют в вирусном геноме на всем протяжении эволюции самих вирусов и эукариотов.

В случае вируса полиомы три различных белка («малый», «средний» и «большой» Т-антигены) кодируются «ранней» репли-кативной областью генома, которая также активна в процессе вирусной трансформации клеток. Анализ структуры этих генов показал, что они являются «перекрывающимися» генами внутри вирусного генома. R. Kamen и соавт. (1981) сконструировали клоны указанных генов путем получения их ДНК-копий в реакции обратной транскрипции трех ранних вирусных иРНК. Определение биологической активности клонов показало, что они обладают различными свойствами и эффектами, в результате чего удалось связать два клона со средним и большим антигенами.

В экспериментах по трансфекции средний антиген индуцировал морфологические изменения и независимую от субстрата пролиферацию реципиентных клеток, тогда как большой Т-антиген создавал независимость клеток от сыворотки и длительности культивирования [Houweling A. , I980]. Эти и другие результаты имели большое значение для общего понимания механизма трансформации и дальнейших исследований данного явления, так как выявили ряд конкретных критериев трансформации клетки и определили роль в этом процессе экспрессии разных вирусных генов. Вероятно, фенотипы «перевиваемости» и «иммортализа-ции», которые позволяют клеткам «отвечать» на онкоген ras, связаны с одним или несколькими вирусными онкогенами.

Далее Н. Land и соавт. (1983) показали, что при котранс-фекции клеток REF онкогенами средним Т и ras фенотип реципиентных культур не отличался от такового при введении лишь одного гена в отдельности. Однако котрансфекция эмбриональных фибробластов онкогенами большим Т и ras приводила к критическим изменениям реципиентных клеток: в культуре REF быстро появлялись пролиферирующие фокусы трансформированных клеток. Эти фокусы роста состояли из трансформированных клеток, формирующих перевиваемые клеточные линии и опухоли у иммунодефицитных мышей.

Таким образом, в этих экспериментах были получены доказательства недостаточности, «дефектности» одиночного трансформирующего гена ras в отношении эмбриональных фибробластов. которые, однако, при действии двух онкогенов (один из них — v-onc) подвергались полной злокачественной трансформации |Land H. et al. , 1983).