Недостаточность единичного онкогена для полной трансформации клеток

душ их разделах книги, вторичные эмбриональные фибробласты крыс (REF), прошедшие лишь несколько пассажей и мало отличающиеся от полностью «нормальных» клеток. Трансфекция монослоя REF препаратом онкогена Ha-ras не приводила, как это имело место в опытах с NIH ЗТЗ-фибробластами, к формированию очагов трансформации клеток. Подобные условия транс-фекции онкогена в системах NIH 3T3 или rat 1 приводили к формированию сотен очагов трансформации монослойных культур. Специальные опыты показали, что результаты трансфекции зависят не столько от трансформирующих свойств онкогена Ha-ras, сколько от «ответа» реципиентных клеток REF на экзогенный онкоген. В трансформированных клетках REF онкоген ras не экспрессировался, т. е. находился в полностью «молчащем» состоянии. Если эти клетки спустя несколько недель культивирования переносили в полужидкий агар, то в этих условиях через 2— 3 нед наблюдался рост колоний трансформантов. Следовательно, лишь один признак, характеризующий трансформацию клеток и проявляющийся в субстратиезависимой пролиферации в агаре, контролировался онкогеном ras (см. гл. 4).

Известно, что в ряде лабораторий изучалась трансформирующая способность препаратов ДНК из опухолей человека и животных для гомологичных нормальных фибробластов. Как в ранних исследованиях, так и в более поздних работах все многочисленные попытки обнаружить в этих условиях трансформирующий эффект опухолевых образцов ДНК были безуспешными [Князев П. Г.
и др. , 1980].

На сегодня известна лишь одна публикация возможной (положительной) трансформации диплоидных фибробластов человека препаратами ДНК, изолированными из клеточной линии MOLT-4; эта линия имеет лимфобластондное происхождение [Sutherland В. , Bennett P. , 1984). Реципиентные клетки после трансфекции указанным препаратом ДНК приобретали способность к субстратиезависимой пролиферации, которая сохранялась свыше 30 пассажей клеток. Трансформирующий эффект препарата ДНК MOLT-4 снимался обработкой ДНКазой и некоторыми эндонуклеазами рестрикции, например Bgl II и ВатН I. Следует отметить, что в клеточной линии MOLT-4 ранее в экспериментах по трансфекции клеток NIH 3T3 был идентифицирован трансформирующий ген ras [Eva A. et al. , 1983J. Возможно, что дальнейшие опыты с этой линией клеток позволят установить роль онкогенов семейства ras в трансформации первичных фибробластов человека препаратом ДНК MOLT-4.

В соответствии с идеей недостаточности для полной трансформации клеток одиночного гена, работающего лишь на конкретном отдельном этапе злокачественной трансформации клетки, эти неудачи становятся понятными. Тем не менее использование в качестве реципиентных клеток NIH 3T3, отличающихся гиперчувствительностью к трансформации, можно рассматривать как