Онкогены опухолей человека и животных

паратов ДНК в клетку существенно повысило эффективность процедуры трансфекции. Было показано, что эффективность транс-фекции возрастает с улучшением принципов селекции трансформантов.

Значительное влияние на результаты трансфекции как метода обнаружения трансформирующих генов оказывают сами реци-пиентные клетки. В большинстве экспериментов для определения трансформирующих генов в ДНК опухолей человека в качестве реципиентных клеток использовали линию пренеопластических клеток мышей NIH ЗТЗ. Эти клетки анэуплоидны, постоянно пролиферируют и, в отличие от нормальных диплоидных фибро-бластов, имеющих ограниченные сроки культивирования и количество пассажей, обладают строго выраженной зависимостью пролиферации от субстрата роста (подложки) и характеризуются контактным торможением роста. Более того, у этих клеток обнаружена исключительно высокая чувствительность к восприятию в собственный геном и фиксации чужеродной ДНК. Появление фокусов трансформированных клеток в монослое, а также субстратнезави-симую пролиферацию клеток NIH ЗТЗ в полужидком агаре стали использовать в качестве критерия успешной трансфекции. Тем не,менее по непонятным причинам только 10—20% испытуемых образцов ДНК из опухолей и опухолевых клеточных линий оказываются способными индуцировать трансформацию клеток NIH ЗТЗ в экспериментах по трансфекции [Pulciani S. et al. , 1982; Land H. et al. , 19831.

Следует особо отметить, что высокомолекулярные образцы ДНК из нормальных клеток птиц и человека (контроли) не способны вызывать трансформацию клеток NIH ЗТЗ. Однако эти же, но фрагментированные (размер фрагментов ^ 0,5—5,0 т.
п. о. ) препараты ДНК лимфоцитов кур и человека индуцируют, правда, с очень низкой частотой (<С 0,002 очага трансформации/мкг ДНК/Ю⁶ клеток) злокачественную трансформацию реципиентной культуры [Cooper G. , Lane М. -А. , 1984; Schafer R. et al. , 1984]. Эти данные свидетельствуют о том, что в принципе в нормальной клетке существуют гены, способные индуцировать неопластическую трансформацию.

Молекулярный анализ трансформантов клеток NIH ЗТЗ, получаемых после трансфекции препаратами ДНК из опухолей человека, значительно упростился после открытия и выделения уникальных клонов умеренно повторяющихся последовательностей генома человека (семейство Alu, Kpn, BamH I). Наличие подобных последовательностей в ДНК трансформантов, определяемых гибридизацией соответствующих плазмид с ДНК реципиентных клеток, оказалось уникальным маркером переноса человеческой генетической информации (например, Alu-последовательностей) в геном мышиных клеток N1H ЗТЗ. Вероятность подобного события достаточно велика, поскольку в геноме человека примерно 5-Ю⁵ умеренно повторяющихся Alu-последовательностей при-