Онкогены опухолей человека и животных

иных активирующих событий приобретают способность трансформировать NIH ЗТЗ и некоторые другие реципиентные клетки. Поскольку нефункционируюшие аналоги (аллели) указанных генов в нормальных клетках по ряду характеристик отличаются от «работающих» в экспериментах по трансфекции, их деятельное состояние стали связывать с активацией, включением [Reddy E. et al. _f 1982; Santos E. et al. , 1982; Capon D. et al. , 1983a, 1983b; Land H. et al. , 1983a].

Первоначальные исследования в этой области были направлены на определение молекулярных детерминант (прежде всего нуклеиновых кислот и ферментов), ответственных за трансформацию клеток, подвергавшихся воздействию канцерогенных веществ [Weinberg R. , 1983]. Схема подобных экспериментов была простой. Образцы ДНК выделяли из опухолей индуцированных животных химическими канцерогенами, например MX или ДМБА, или, в других случаях, из клеток, трансформированных in vitro этими же веществами. Полученные образцы ДНК вводили в соответствующие нетрансформированные реципиентные культуры и монослои реципиентных культур просматривали на наличие фокусов роста трансформированных клеток. Появление трансформантов свидетельствовало о присутствии действующей доминантной трансформирующей информации в испытуемых образцах клеточной донорской ДНК [Weinberg R. , 1982].

Эксперименты по переносу генов (трансфекции) показали, что образцы ДНК определенных типов химически трансформированных клеток несут в своем составе трансформирующие последовательности, онкогены [Shin С. et al. , 1979, 1981; Cooper G. , 1980; Weinberg R. , 1982; Cairns J. . Logan J. , 1983]. Существование подобных трансформирующих последовательностей, выявляемых в экспериментах по трансфекции, в последующем было продемонстрировано в ДНК большого количества различных опухолей, биопсииного материала человека и опухолевых клеточных линий [Князев П. Г. и др. , 1980. 1984; Moelling К. et al. , 1980; Cooper G. , 1982; Colgfarb M.
et al. , 1982; Lane M. et al. , 1982; Parada L. et al. , 1982; Pulciani S. et al. , 1982; Weinberg R. , 1982; Capon D. et al. . 1983; Diamond A. , 1983; Eva A. et al. , 1983; Hall A. et al. . 1983; McCoy M. et al. , 1983; Shimizu K. et al. , 1983].

Большинство исследователей с целью введения в клетку чужеродных образцов ДНК в настоящее время используют кальций-фосфатную технику, разработанную F. Graham, E. Van Der Eb (1973). Стерильные кальциевые преципитаты ДНК более эффективно захватываются реципиентными клетками. Дальнейшая судьба чужеродной ДНК, ее транспорт и проникновение в ядро изучены слабо. Известно, что примерно 2 % введенной ДНК определенное время персистирует в трансфецированных клетках; этого, очевидно, оказывается достаточно для процесса интеграции экзогенной ДНК с геномом реципиентных клеток [Hill M. , Huppert J. , 1970]. Использование кальций-фосфатной техники введения пре-