Активация клеточных протоонкогенов в онкогены

ных линиях, полученных из карцином мочевого пузыря, легкого, толстой кишки и желчного пузыря, равно как и в биопсийной ткани из карцином легкого, поджелудочной железы, толстой кишки и рабдомиосаркомы [Capon D. et al. _t 1983].

J. Grath и соавт. (1983) показали, что c-Ki-ras 2 потенциально кодирует 2 различных белка р21 (молекулярная масса 21 000) путем дифференциального использования двух из пяти его кодирующих экзонов. Оставалось неясным, какой из этих белков (или оба) обладает трансформирующей активностью.

Как видно из изложенного выше, активация гена c-Ha-ras 1 в клетках Т24 карциномы мочевого пузыря человека, вызванная изменением одного нуклеотида, дает начало синтезу белка р21, имеющему одну измененную аминокислоту и отличающемуся иной электрофоретической подвижностью.

Присутствие белков р21^г" с различными электрофоретическими подвижностями в двух клеточных линиях карцином легкого и толстой кишки, содержащих активированные гены c-Ki-ras 2, равно как и в клетках NIH ЗТЗ, трансформированных ДНК из этих опухолевых линий, указывало на то, что ген c-Ki-ras 2 мог быть активирован сходным генетическим поражением. Для исследования этой возможности D.
Capon и соавт. (1983) клонировали ген c-Ki-ras 2 ДНК из клеточных линий человеческих карцином легкого (Calu-1) и толстой кишки (SW480), несущих активированные гены c-Ki-ras 2.

Анализ нуклеотидных последовательностей показал, что активация гена в онкоген произошла благодаря двум отдельным мутациям одного и того же кодона в указанных двух клеточных линиях. При помещении этих кодирующих элементов клонированного гена c-Ki-ras 2 под транскрипционный контроль гетерологич-ной экспрессионной системы были получены данные в пользу той точки зрения, что наблюдавшиеся структурные мутации являются необходимыми, а в определенных случаях и достаточными для придания гену трансформирующей активности.

D. Capon и соавт. установили, что: 1) единственный нуклеотид в кодоне 12 отличает области ДНК, кодирующие белок р2Г, триплет ГГТ, кодирующий глицин в позиции 12 продукта нормального гена c-Ki-ras 2, становится в результате мутации ГТТ, кодирующим валин в клетках SW480 (карцинома толстой кишки), и ТГТ, кодирующим цистеин в клетках Calu-1 (карцинома легкого); 2) второе различие в нуклеотидах найдено вверх от инициирующего кодона АТГ, что указывает на существование двух различных трансформирующих аллелей в клеточной линии SW480.

В описанной работе показано, что транскрипты с активированных трансформирующих генов клеточных линий карцином легкого и толстой кишки человека кодируют белки, отличающиеся друг от друга и от продукта считывания протоонкогена c-Ki-ras 2. Оба различия находятся в позиции 12 кодируемых белков р21, где валин и цистеин замешают глицин, присутствующий в нетран-