Активация клеточных протоонкогенов в онкогены

ния числа наборов хромосом; 2) изменения числа отдельных хромосом; 3) перестройки хромосом (сегментные мутации: деле-ции, дупликации, инверсии, транслокации, транспозиции); 4) генные (или точечные) мутации. Первые 3 типа мутаций обозначают под общим названием «хромосомные аберрации».

Приведенные цитаты из авторитетных источников говорят о том, что практически все рассмотренные нами выше механизмы активации клеточных протоонкогенов представляют собой тот или иной вид мутаций: либо на хромосомном, либо на генном уровне, либо на уровне отдельных нуклеотидов, чем являются точковые (точечные) мутации. Это относится и к трансдукциям, и транслокациям, и инсерциям, и амплификациям, и точковым мутациям.

Точковые мутации в канцерогенезе привлекли особое внимание в связи с серией статей по активации онкогенов, появившихся в конце 1982 г. Проведенные исследования особенно примечательны в том отношении, что впервые в истории онкологии приурочили сложнейшее биологическое явление — трансформацию и туморогенез — к конкретному простому молекулярному акту— замене одного нуклеотида ДНК другим. Исчерпывается ли указанным элементарным молекулярно-генетическим «ходом природы» вся сложность феномена неоплазии? Вряд ли. Однако в существовании причинно-следственной связи между таинственным биологическим явлением — раком — и молекулярно-химиче-ским событием, на уровне ДНК, сомневаться не приходится. Данная простая схема может обрастать дополнительными фактами и деталями, но принцип, по-видимому, сохранится.

Итак, точковая мутация — это мутация, затрагивающая лишь один нуклеотид из тысяч. По данным сразу трех лабораторий (R. Weinberg, M.
Barbacid и М. Wigler), она превращает доброкачественный протоонкоген в активный онкоген. Рассмотрим подробнее, как это было установлено.

Обработкой рестрикционными эндонуклеазами ДНК опухоли и гомологичной нормальной ткани расщепили на фрагменты, с помощью техники трансфекции идентифицировали сегменты, содержащие онкоген и протоонкоген, и клонировали те и другие. Таким образом, исследователи располагали клонированными вариантами обоих генов, поэтому определение характера мутации и ее точной локализации при современном уровне развития молекулярной биологии и генной инженерии не представляло непреодолимых трудностей и явилось фактически делом техники.

В принципе было сделано следующее.

Исследователи располагали двумя возможностями: 1) определить полную нуклеотидную последовательность (что теперь и делается во многих случаях) каждого из генов, имеющих протяженность около 5000 п. о. ; 2) сравнить две последовательности. Практически более удобным оказался 2-й путь: сначала установили ту область в генах, которая определяла их критическое различие. Это осуществили путем генерирования рекомбинантов