Репликация ретровирусов

в процессе синтеза ( —)-цепи вирионной ДНК [Varmus H. et al. , 1979; Gerard G. , Grandgenett D. , 1980]. В этих исследованиях было установлено, что олигонуклеотиды, образующиеся в результате действия РНКазы Н на гибридные молекулы РНК. ДНК, могут служить в качестве затравки для синтеза второй, (-f )-цепи вирионной ДНК [Boone L. , Skalka A. , 1981; Varmus Н. , Swan-strom R. , 1982]. Вероятно, в условиях in vivo данный фермент выполняет именно такую роль.

С ДНК-полимеразой вируса миелобластоза птиц ассоциирована еще одна ферментативная активность, эндонуклеазная. Этот фермент также располагается в коре вириона, имеет молекулярную массу 32 кд и является продуктом процессинга {J-субъединицы ДНК-полимеразы, т. е. В-фрагментом [Gerard G. , Grandgenett D. , 1980]. Этот важный фермент, связанный с провирусом, вероятнее всего, участвует в процессе интеграции вирусной ДНК в клеточный геном [Gerard G. , Grandgenett D. , 1980; Varmus H. , Swanstrom R. , 1982].

Большинство молекул вирусной ДНК, синтезированной in vitro на субъединице РНК, представляют собой короткие фрагменты ограниченной части вирусного генома [Varmus H. et al. , 1979]. Иногда удается получить короткие транскрипты, представляющие в сумме полную копию вирусной или гетерологичной РНК. Это позволило успешно использовать данный метод для получения комплементарной ДНК (кДНК) отдельных вирусных и клеточных генов и успешно осуществить их клонирование [Maniatis Т.
et al. , 1976; Boone H. , Skalka A. , 1981].

Вирусная ДНК составляет небольшую часть (0,0001 % или меньше) от всего препарата ДНК инфицированных клеток. Это существенно затрудняло изучение биосинтетических процессов, приводящих к образованию ДНК-провируса. Тем не менее в ходе репродукции ретровирусов в клетке удалось определить 3 основные формы вирусной ДНК: линейную двухцепочечную, циркулярную двухцепочечную и ковалентно-интегрированную в геном хозяйской клетки [Varmus H. et al. , 1979; Varmus H. , 1982].

Эти формы ДНК, как было показано в экспериментах по трансфекции, содержат всю генетическую информацию, представленную в субъединице вирионной РНК [Varmus H. , 1982].

Количественно преобладающая линейная форма вирусной ДНК имеет такие же размеры, как и субъединица вирионной РНК, т. е. 5—10 тысяч пар оснований (т. п. о. ). В принципе — это полная копия провируса, т. е. ( —)-цепь вирусной ДНК, включающая отдельные фрагменты (-г-)-цепи вирионной ДНК, размером от нескольких сот до тысячи пар нуклеотидов. В отдельных случаях эта форма ДНК может быть выявлена в виде полностью двухцепочечной молекулы, "т. е. содержащей как (—)-так и ( + )-цепи провируса [Varmus H. et al. , 1979].

В настоящее время известно, что последовательности нескольких сот нуклеотидов, расположенных на обоих концах линей-